Parte 1 -
Preparación de la muestra
La clave para una identificación
exitosa consiste en partir de una "muestra adecuada".
Muchas bacterias patógenas no crecen adecuadamente en medio de cultivos
sólidos, tornando difícil su identificación por los métodos
tradicionales. A lo largo de
los años se han desarrollado baterías de pruebas destinadas a
identificar las bacterias. Las mismas incluyen, entre otras, coloración de las
mismas bajo variadas condiciones y diversas pruebas bioquímicas. Estas pruebas requieren, en general,
la factibilidad de un buen crecimiento bacteriano.
Muchas bacterias patógenas crecen pobremente en medios sólidos y otras
solo lo hacen en medios líquidos, tornando difícil (cuando no
imposible) su identificación por los métodos clásicos. Sin embargo
los métodos moleculares permiten sobreponerse a estas
limitaciones.
Por otra parte, algunas especies bacterianas no pueden, con los métodos
tradicionales, diferenciarse de especies muy cercanas. Para estas
especies los métodos moleculares resultan los mas convenientes. Sin embargo aún bacterias que desarrollan
difícilmente en cultivos de laboratorio pueden ser identificadas por los
laboratorios que utilizan tecnologías de amplificación génica.
Este "laboratorio virtual" pretende simular que usted se
encuentra en un laboratorio de identificación bien equipado. Y la
propuesta es que Ud. pueda identificar una muestra bacteriana.
Se asume que se han
realizado las etapas previas que llevan a la obtención de colonias que
desarrollan en un medio sólido de una caja de Petri.
La primera etapa, en este punto, consiste en tomar una colonia del mismo (1) y colocarla en un tubo de
una microcentrífuga. (2)
El proceso para extraer el ADN bacteriano consiste en disolver la pared
bacteriana con una "mezcla digestiva" bufferada, que es parte
de un kit comercial. La mezcla contiene las enzimas necesarias para
realizar dicha digestión. Este proceso puede tomar varias horas hasta
su terminación (3).
Dado que se usarán otras enzimas en el próximo paso, para evitar que
las de la "mezcla digestiva" las destruyan es necesario
eliminarlas. Este paso se realiza desnaturalizándolas a 100°C. (4)
Por último, los
restos celulares se centrifugan, quedando en el fondo del tubo. El ADN
queda en el sobrenadante y es transferido al tubo para realizar la PCR.
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