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A- CONTROL ENDOCRINO DE LA MADURACION DE OVOCITOS DE BUFO ARENARUM

1.1- ROL DE LA GLANDULA PINEAL  

1.1.a- Participación de la glándula pineal en el comportamiento metabólico de ovocitos ováricos y celómicos 

            La participación de la glándula pineal en la determinación del estado de madurez citoplasmática, fue evaluada tomando como parámetro indicativo el comportamiento metabólico de los ovocitos de Bufo arenarum.
Para ello, ovocitos ováricos obtenidos de hembras recolectadas en los períodos de reposo (Mayo – Agosto) y reproductor (Setiembre – Noviembre) fueron incubados con un homogenado de glándula pineal homóloga. Posteriormente se procedió a determinar la capacidad de las mitocondrias aisladas para oxidar citrato y fumarato según se detalla en 4.1 de Materiales y Métodos.

Los datos obtenidos durante tres años consecutivos demuestran que, en los ovocitos ováricos del período de reposo, el tratamiento con la glándula pineal determina un comportamiento metabólico muy variable con valores del índice C/F que se ubican en el rango de 0 - 38% de incremento con respecto a los controles (datos no graficados). En el período reproductor, por el contrario, el incremento es más estable (Fig. 1 A) y está en el orden del 85% (P < 0,01).

            Un esquema experimental idéntico al anterior, utilizando ovocitos libres de células foliculares (ovocitos celómicos) obtenidos con la técnica de ovulación “in vivo”, permitió determinar que durante el período reproductor el tratamiento con glándula pineal induce un significativo aumento del índice C/F (P < 0,01), que alcanza al 110% (Fig. 1 B). Los valores obtenidos con los ovocitos celómicos del período de reposo (no graficados), muestran un amplio rango de dispersión en el incremento del índice.

En todos los casos nuestros resultados establecen que el incremento del índice observado se debe a un aumento en la velocidad de oxidación del citrato y a una disminución en la velocidad de oxidación del fumarato, con respecto a los controles. 

1.1.b- Incidencia de la melatonina en el metabolismo de ovocitos ováricos           

Considerando que la melatonina es la principal hormona que media los efectos de la glándula pineal, ovocitos ováricos de los dos períodos en estudio fueron incubados con N-acetil-5-metoxitriptamina. Dado que el compuesto usado es un análogo sintético de la melatonina, en adelante se hace referencia al mismo con el nombre de la hormona.

Datos preliminares indicaron que la melatonina, al igual que la glándula pineal, tiene un efecto muy variable sobre el comportamiento metabólico de los ovocitos obtenidos en el período de reposo. Por esta razón, este período fue dividido en dos etapas: fase inicial y fase final.

La Figura 2 muestra los resultados obtenidos con ovocitos ováricos extraídos de animales capturados en la fase inicial del período de reposo (Mayo - Junio), e incubados con melatonina en dosis comprendidas entre 0,6 y 2,4 mg/ml.

            Se puede observar un aumento del índice C/F a partir de la concentración de 1,2 mg/ml, con un efecto máximo a la dosis de 1,8 mg/ml, que determina un marcado incremento (P < 0,01) respecto al control. La dosis mínima ensayada es inefectiva, mientras que la máxima (2,4 mg/ml) produce una disminución del índice que alcanza valores ligeramente inferiores a los controles.

Por el contrario, al tratar con melatonina ovocitos ováricos obtenidos de hembras capturadas en la fase final del período de reposo (Julio y principios de Agosto), no se observaron modificaciones en el comportamiento metabólico de los mismos con ninguna de las dosis ensayadas.

            Los ovocitos ováricos obtenidos de hembras capturadas durante el período reproductor muestran una menor sensibilidad a la melatonina, obteniéndose aumento en el índice C/F sólo con las concentraciones comprendidas en el rango de 2,4 y 5 mg/ml (Fig. 3).

El incremento máximo, de 129% respecto al control (P < 0,01), se alcanza con la dosis de 3 mg/ml 
            Con el objeto de establecer el tiempo adecuado para la expresión del efecto hormonal, se determinó el índice C/F a distintos tiempos de incubación con melatonina en las dosis previamente establecidas como óptimas para cada período. 
Los resultados de la Figura 4 muestran, en el período reproductor, un incremento de este parámetro a partir de los 30 min. de incubación, con máximo aumento entre los 60 y 90 min. y declinación de este parámetro a las 2 hs. de tratamiento. Un comportamiento similar fue observado en ovocitos ováricos de hembras capturadas en la fase inicial del período de reposo. En base a estos datos se eligió 1 hora como tiempo de incubación para todos los ensayos realizados con melatonina.