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1.1.c- Análisis de la interacción melatonina – hipófisis 

            Con el propósito de determinar el nivel de acción hormonal y la interacción melatonina – hipófisis “in vivo”, se ensayó comparativamente el efecto de la melatonina en ovocitos ováricos (provistos de células foliculares) y ovocitos ovulados bajo estímulo hipofisario, recogidos de la cavidad pleuroperitoneal (ovocitos libres de células foliculares).

            En esta serie de ensayos el mismo animal se usó como control y experimental para lo cual se procedió de la siguiente manera: a cada ejemplar capturado en el período reproductor se le extrajo, previa anestesia con éter, porciones de ovario que fueron incubadas con y sin melatonina. Inmediatamente se ligaron los oviductos a la altura del ostium y se indujo la ovulación “in vivo” según se detalla en 2.2 de Materiales y Métodos. Los ovocitos celómicos obtenidos fueron incubados con y sin melatonina en las mismas condiciones que los ovocitos ováricos.

Como puede observarse en la Figura 5 si bien la melatonina induce un aumento significativo (P < 0,01) del índice C/F en los dos tipos de ovocitos analizados, en valores absolutos el incremento de la capacidad oxidativa es mayor en los ovocitos celómicos (168%) que en los ovocitos ováricos (92%), comparados con sus respectivos controles.

Experimentos similares fueron realizados con ovocitos obtenidos de animales capturados durante el período de reposo. Porciones de ovario fueron disecadas e incubadas durante 1 hora con melatonina (1,8 mg/ml). Luego de extraer la muestra el mismo animal fue inyectado con un homogenado de hipófisis homóloga.

Debido a que durante la fase inicial del período de reposo es poco factible obtener ovulaciones “in vivo”, al cabo de 8 hs. De la inducción hipofisaria se tomó una nueva muestra de ovario que fue incubada con melatonina en idénticas condiciones. De ambas muestras se aisló la fracción mitocondrial para determinar el índice C/F. Los resultados (no graficados), permitieron determinar que durante esta fase la melatonina induce un comportamiento metabólico similar al observado en el período reproductor, con un incremento del índice C/F del orden del 98% en ovocitos ováricos previo al tratamiento hipofisario “in vivo”, y de 125% posterior al mismo (P < 0,01).

Por otra parte el análisis realizado en ovocitos ováricos obtenidos en la fase final del período de reposo, confirma que la melatonina no modifica el índice C/F (Fig. 6). Sin embargo, después del tratamiento hipofisario “in vivo”, en aquellos animales que en este período no ovulan la hormona pineal induce en los ovocitos ováricos un incremento (44%) de dicho índice (Fig. 6B).

Adicionalmente, cuando en este período fue posible obtener ovulaciones, la melatonina indujo un incremento significativamente mayor (90%) en los ovocitos celómicos.  

1.1.d- Participación de la glándula pineal y de la melatonina en la ovulación 

Con el propósito de estudiar la participación de la pineal en la ovulación, porciones de ovario (1 - 2 g) tomados de animales capturados durante el período reproductor, fueron incubadas por duplicado en 15 ml de Ringer con el agregado de un homogenado de glándula pineal (1 glándula/incubación) o melatonina (3 mg/ml). 
Al cabo de 1 hora, al medio de incubación de una de las muestras de cada par se le añadió un homogenado de hipófisis homóloga (1glándula/incubación), a fin de inducir la ovulación “in vitro”. Luego de 12 hs. de tratamiento, el porcentaje de ovocitos ovulados fue estimado en relación al número total de ovocitos totalmente crecidos presentes en cada una de las muestras. 

Tabla 1

Efecto de la glándula pineal y de la melatonina en la ovulación