Reacción acrosómica y actividad proteolítica

Contenidos
Reacción acrosómica y actividad proteolítica en Leptodactylus chaquensis | Inhibidores de la tripsina y diámetro del halo de reacción | Inhibidores de tripsina y actividad de crudos enzimáticos | Influencia del EDTA | Halo de reacción en Bufo arenarum

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   Incubando espermatozoides de Leptodactylus chaquensis en extendidos de gelatina se observó el característico halo de reacción que señala la presencia de enzimas proteolíticas alrededor del extremo anterior del espermatozoide en un 77,2 ± 5,2 % ( media ± , n=184 ) de los espermatozoides observados (Fig. 6: c y C).

Fig. 6: Espermatozoides de Leptodactylus chaquensis incubados en film de gelatina de colágeno ( Contraste de fases).
HR: halo de reacción ; AC: acrosoma
a - A: espermatozoide en Fase 1.
b - B: espermatozoide en Fase 2.
c - C: espermatozoide en Fase 5

   Es importante hacer notar que el halo de reacción aparece en la región que antes ocupaba el acrosoma y que mientras el mismo no se rompe, no se observa actividad proteolítica (Fig. 6: a y A; b y B ). En otra serie de experimentos, se incorporaron diversos tipos de inhibidores de enzimas proteolíticas al film de gelatina.

   La Tabla 2 muestra que la presencia de los mismos disminuye en mayor o menor grado los halos de reacción confirmando la actividad proteolítica de estas enzimas.

EFECTO DE LOS INHIBIDORES DE TRIPSINA SOBRE LA ACTIVIDAD PROTEASICA DE CRUDOS ENZIMATICOS DE LEPTODACTYLUS CHAQUENSIS

   Por otra parte, si se obtienen crudos enzimáticos a partir de un homogenado de espermatozoides en los que se verificó la ruptura de los acrosomas, el producto resultante es activo cuando se lo incuba utilizando como sustrato gelatina o . En ambos casos, la adición al medio de incubación de inhibidores de proteinasas, reducen en mayor o menor grado el ataque a los sustratos ( Tabla 3, Fig. 7).
   Mientras se efectuaban estas experiencias, llegó a nuestras manos un trabajo similar realizado en Rana pipiens (). Si bien en esta especie el acrosoma no es visible con microscopía óptica, también aquí aparece un halo de reacción en la zona apical del espermatozoide y el desarrollo del halo es inhibido no sólo por la presencia de inhibidores de proteinasas, sino también por el . Este último producto fue experimentado también en Leptodactylus chaquensis, encontrándose que en nuestras condiciones de trabajo el 10 mM inhibía también la aparición del halo en la mayor parte de los espermatozoides. El porcentaje de espermatozoides con halo en estas preparaciones fue 7,9 ± 3,3 % (media ± EEM, n=77). Sin embargo, este efecto parece ser debido a una inhibición de la ruptura del acrosoma mas que a una inhibición de las enzimas proteolíticas en sí. En efecto, en aquellos espermatozoides en los cuales el acrosoma se rompe, el halo no es significativamente diferente de los controles (Tabla 4 ). Por otra parte, la actividad proteolítica de los crudos enzimáticos no es afectada por la presencia de 10 mM en el medio de incubación (Tabla 5). En Rana pipiens, por lo tanto, al no ser posible la observación del acrosoma probablemente no pudo establecerse el poder inhibidor del sobre la reacción acrosómica.