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En
el cultivo de tejidos, el ciclo de una planta difiere del que
ocurre en la naturaleza. El nuevo individuo puede desarrollarse
por embriogénesis somática (generación de embriones
somáticos, asexuales o adventicios iniciados a partir de células
que no son producto de la fusión de gametos) o por organogénesis
(generación de órganos como ser yemas o meristemas radicales a
partir de los explantes directamente o a partir de callos). |
| La embriogénesis somática es considerado como un excelente método de
obtención de plantas porque ambos meristemas, caulinar y
radical, están presentes simultáneamente. Este hecho permite
encapsularlos y producir las denominadas semillas sintéticas.
El desarrollo morfológico de embriones
somáticos en dicotiledóneas es parecido al de los embriones
cigóticos, ya que en ambos se diferencia una estructura
bipolar, pasando por los estadios de desarrollo pro embrionarios
y embrionarios. En cuanto a las diferencias, los embriones somáticos
crecen independientes de correlaciones físicas, fisiológicas y
genéticas que ocurren durante el desarrollo de la embriogénesis
cigótica. Además, los embriones somáticos no presentan
endosperma, pudiendo presentar desarrollo anormal.
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La embriogénesis somática en
plantas de paraíso se induce a partir de embriones cigóticos
inmaduros, 8-9 semanas después de ocurrida la polinización.
Estos embriones inmaduros son los explantes, cuyos tamaños
pueden ser de < 1mm hasta 2,5 mm. |
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Luego de ser
desinfectados los frutos, se extraen los explantes y cultivan en
tubos de ensayo (1 embrión/ tubo), en un medio de cultivo químicamente
definido y luego son incubados en un cuarto climatizado a 27°C
aproximadamente con un fotoperíodo de 14 hs. Se puede llegar a
obtener hasta 28 embriones somáticos por explante. |
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La inducción de embriones somáticos
se realiza directamente en
las células epidérmicas y subepidérmicas de los embriones cigóticos
inmaduros. Luego de 5-7 días de iniciado el cultivo, la
actividad meristemática permite el desarrollo de estructuras
nodulares compuestas de pequeñas células con núcleos y
citoplasma densamente teñidos. Estas estructuras forman varias
estructuras globulares que dan lugar a estructuras con dos
cotiledones primordiales y finalmente a embriones somáticos
claramente bipolares sin conexiones vasculares con el explante
original. |
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ocurre con más frecuencia en el hipocótilo, pero también se
observan en la base de los cotiledones o en la superficie de la
radícula. Los embriones somáticos pueden ser individuales o
estar fusionados en grupos (en el mismo embrión pueden
encontrarse ambos tipos); y aparecen directamente en el explante
sin formación de callo. |
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La mayoría de los embriones
globulares se desarrollan hasta ser estructuras
bipolares, pasando por el estado de corazón, torpedo
y cotiledonar. En general, los
embriones muestran hipocótilo y cotiledones bien definidos,
pero algunos tienen estructuras fusionadas o escindidas en el
hipocótilo. |
| Cuando
los embriones somáticos se extraen y transfieren a un medio con
la misma composición, dentro de las 2 semanas de transferencia
ocurre la embriogénesis secundaria. |
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Luego, estos embriones somáticos
son subcultivados para obtener plantas a partir de ellos, también
en medios de cultivo químicamente definidos y bajo las mismas
condiciones físicas descritas para inducir la embriogénesis
somática. Generalmente sólo se obtienen plantas de aquellos
embriones mayores a 1mm.
Estas pequeñas plantas crecen en los
tubos de ensayo durante 4 semanas, luego se las saca, se las
lava con agua de canilla para remover los restos de medio de
cultivo de las raíces
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| Inmediatamente
se las transfiere a envases de plástico con arena, turba y
perlita, depositándolos en una cámara a 25°C y 80% de humedad
relativa durante 20 días. |
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Aquellas plántulas con buen
desarrollo de tallo y raíces son transplantadas luego a macetas
con suelo y llevadas a invernadero. |
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Esquema del Ciclo de vida del Paraíso
cultivado in vitro
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