Curso de
Microbiología General
de Enrique Iáñez
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25.
TRANSFORMACION BACTERIANA
ÍNDICE
1 CONCEPTO Y APROXIMACIÓN HISTÓRICA
2 TRANSFORMACIÓN NATURAL
2.1 CARACTERES GENERALES DE LA TRANSFORMACIÓN NATURAL
2.2 TRANSFORMACIÓN EN BACTERIAS GRAM POSITIVAS:
2.2.1 EN Streptococcus pneumoniae
Desarrollo de la competencia (y modo de unión del ADN a la superficie celular):
Entrada del ADN y fase de eclipse
Destino del ADN del exogenote
2.2.2 EN Bacillus subtilis
Desarrollo de la competencia
Entrada del ADN y fase de eclipse
2.3 TRANSFORMACIÓN EN BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
2.4 SIGNIFICADO BIOLÓGICO DE LA TRANSFORMACIÓN NATURAL
3 TRANSFECCIÓN
4 TRANSFORMACIÓN ARTIFICIAL
BIBLIOGRAFÍA
BARRA DE EXPLORACIÓN: Microbiología General
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1. CONCEPTO Y APROXIMACIÓN
HISTÓRICA
La transformación se puede definir como la variación hereditaria de una célula
bacteriana susceptible, originada por la captación de ADN desnudo libre en el
medio, con la posterior recombinación del exogenote con el genomio de la célula en
cuestión (endogenote). Tras la transformación, la célula que ha recibido el ADN se
suele denominar transformante.
Recordemos brevemente los hitos históricos que jalonan el descubrimiento de la
transformación en bacterias:
- La transformación fue el
primer proceso de transferencia genética que se describió en los procariotas, y este
hallazgo constituyó la base para suministrar el primer dato incontrovertible acerca de la
naturaleza química del material genético: a partir de 1944 empezó a quedar claro que
era el ADN el portador de la información genética de los seres vivos.
- Todo comenzó con los trabajos
de Griffith (1928) sobre el neumococo. Recuérdense sus clásicos experimentos con las
cepas S (lisas, capsuladas y virulentas) y R (rugosas, no capsuladas y avirulentas),
inoculadas en ratones:
cepas S vivas inoculadas en ratones à ratón muere
cepas R vivas inoculadas en ratones à ratón vive
cepas S muertas por calorà ratón vive
cepas S muertas por calor + R vivas à ratón muere. La
autopsia revela la presencia de neumococos vivos virulentos (tipo S).
- Ni Griffith ni los
investigadores de la época se dieron cuenta de la importancia de este resultado, ni
sacaron la conclusión pertinente: que una sustancia que confiere una nueva propiedad
heredable a un organismo (la "sustancia transformante" procedente de las S
muertas y que captan las R vivas) debe a su vez ser capaz de replicación. (De hecho, y
aunque ahora nos parezca mentira, Griffith pensaba que el principio transformante era el
polisacárido capsular de las cepas S, ausente en las cepas R).
- En 1944 el equipo formado por
Avery, MacLeod y McCarty descubrió la naturaleza del misterioso "principio
transformante": el ácido desoxirribonucleico (ADN). Ellos lograron desarrollar un
sistema in vitro, en el que iban ensayando diversas fracciones (con diferentes
componentes) procedentes de las células S virulentas frente a células R vivas. (A pesar
de los elegante experimentos, la comunidad científica no los aceptó inmediatamente (),
en parte debido a que se suponía más lógico que el material de la herencia fuera algún
tipo de proteínas. Al fin y al cabo, las proteínas tienen una enorme variedad, a base de
20 tipos de aminoácidos. ¿Qué diablos podía significar que el ADN fuera el material
genético, cuando se sabía que era una molécula monótona e insulsa a base de sólo
cuatro tipos de bases nitrogenadas en proporciones casi semejantes?).
- El siguiente paso importante
sobre la transformación lo da Hotchiss (1949), que realiza ensayos in vitro al
estilo de los de Avery y compañía, pero con ADN extremadamente puro. Los remisos
contestatarios no tuvieron más remedio que empezar a batirse en retirada. Como sabemos,
los últimos incrédulos (que en los años 40 eran la mayoría) sólo se convirtieron
(tras el correspondiente arrepentimiento y propósito de enmienda) cuando Hershey y
Chase (1952) realizaron sus ingeniosos experimentos de marcado del ADN y de las proteínas
de un fago. Poco más tarde irrumpieron Watson y Crick con su modelo de la doble hélice,
que sugería el modo de duplicación de la información genética ...pero en fin, todo
esto nos aleja de nuestra historia, y no queremos convertir nuestra narración en un caso
de "novela dentro de otra novela", al estilo de Cervantes.
2. TRANSFORMACIÓN NATURAL
2.1 CARACTERES GENERALES DE LA TRANSFORMACIÓN NATURAL
El ADN, para que sea capaz de transformar, ha de ser de cadena doble.
Para cada evento de transformación basta la interacción de una sola molécula de
ADN con la célula receptora. Por otro lado, el número de moléculas de ADN que puede
tomar una misma célula es limitado, y presenta una cinética de saturación
(meseta que indica que ya no se pueden captar más moléculas). Observen la cinética de
orden 1 en la primera parte de la curva. A partir de cierta concentración de ADN
transformante, se da la meseta de saturación (no aumenta el nº de colonias
transformadas).
No todas las células de un mismo cultivo son transformables en cualquier momento del
ciclo de crecimiento. La competencia es el estado fisiológico característico
que permite captar ADN del medio exterior. Este estado de competencia es diferente
para cada especie bacteriana capaz de experimentar transformación, y dentro de cada
especie está influido por una serie de parámetros como:
- densidad celular del cultivo
- temperatura
- pH
- nutrientes (fuentes de C o de
N, iones...)
Ejemplos:
En Streptococcus pneumoniae la competencia afecta al 100% de las células en
fase exponencial.
En cambio, en Bacillus subtilis solamente una minoría (1-20%) de células se
hacen competentes, y sólo durante la fase estacionaria.
- Se denomina fase de eclipse durante la transformación al período transitorio
durante el cual, si se extrae el ADN recién entrado (exogenote), este ADN es incapaz de
volver a transformar. Es decir, tras su entrada a la célula receptora, el ADN del
exogenote parece haber "desaparecido" transitoriamente a efectos de capacidad
transformadora (ya veremos por qué).
En la transformación natural de diversas especies bacterianas se dan una serie de
fases comunes a todas ellas, aunque en cada caso existen rasgos propios:
- Competencia
- Unión y entrada del ADN exógeno a la célula
- Fase de eclipse
- Destino del ADN exógeno (exogenote): recombinación con el endogenote.
En la naturaleza, la fuente de ADN exógeno suele ser la lisis espontánea de células
de la misma especie, que actúan como "donadoras" (una especie de inmolación o
suicidio altruista, para mayor gloria -o sea, para mayor superviviencia- de la especie).
En otros casos no hay lisis, sino que parte de la población bacteriana extruye ADN, que
pasa al medio.
Existen varios géneros con especies que poseen sistemas naturales de transformación:
Entre las bacterias Gram positivas los ejemplos más estudiados son los de:
Entre las bacterias Gram negativas:
- Haemophilus
- Neisseria
- Moraxella
- Acinetobacter
- Azotobacter
- Pseudomonas
- Cianobacterias del gén. Synechococcus
A continuación describiremos algunos de los sistemas de transformación mejor
conocidos. Primero abordaremos los de bacterias Gram positivas, y posteriormente
aludiremos más brevemente a los de Gram negativas, comentando las diferencias de éstas
respecto de las primeras.
2.2 TRANSFORMACIÓN EN BACTERIAS GRAM
POSITIVAS:
Los sistemas de estas bacterias Gram positivas son inespecíficos respecto de la
captación de ADN exógeno: no distinguen entre ADN homólogo (de la misma especie) o
ADN heterólogo (de otras especies). Sin embargo, aunque físicamente puede entrar ADN
heterólogo, éste se recombina posteriormente con el endogenote sólo en el caso de
presentar con él un grado de homología suficientemente alto. Únicamente se recombinan
moléculas de ADN de la misma especie (o en algunos casos, de especies muy cercanas).
Veamos comparativamente los procesos de transformación en el neumococo (S.
pneumoniae) y en B. subtilis:
2.2.1 EN Streptococcus pneumoniae
Desarrollo de la competencia (y modo de unión del ADN a la
superficie celular):
Como dijimos, el estado de competencia se encuentra condicionado por una serie de
factores, como densidad celular, temperatura, pH, etc.
- La competencia se desarrolla al
final del periodo de crecimiento exponencial (fase logarítmica);
- Afecta prácticamente a la totalidad
de las células del cultivo (100% de células competentes).
- Conforme las células van
creciendo (se van multiplicando), van sintetizando y excretando al medio un péptido
específico (de 5-10 kDa), llamado factor activador de la competencia (FAC). Este
factor no ejercerá su efecto hasta que la densidad celular alcance un valor del orden de
una 107 células/ml, momento en el que el FAC se habrá acumulado hasta lograr
una concentración adecuada para ejercer su función.
- Entonces, el FAC se une a
un receptor específico de la superficie celular, lo que provoca (no se sabe cómo) la
inducción de la expresión de una serie de genes, que codifican unas 12 proteínas
específicas de la transformación, entre las que se cuenta una autolisina.
- Esta autolisina provoca
una degradación parcial y controlada de la pared celular, de modo que quedan al
descubierto complejos de proteínas que son sitios de unión al ADN exógeno
(existen unos 30-80 sitios de unión por cada individuo de neumococo).
- El ADN exógeno libre en el
medio se une a estos sitios, que cuentan con una actividad endonucleasa específica de
transformación: provoca incisiones en una de las hebras del ADN c.d. El
extremo 3' generado queda unido a alguna proteína del complejo receptor.
Las incisiones consecutivas en una misma molécula de ADN exógeno están separadas
entre sí por una media de una 6 kb.
Recordemos que el ADN no tiene por qué ser específico: se puede unir ADN de
procedencias muy diversas (incluso ADN eucariótico).
Entrada del ADN y fase de eclipse
Esta fase se pone de manifiesto en el laboratorio por el hecho de que el ADN exógeno
se convierte a una forma resistente a la DNasa. Esto significa que este ADN ha sido
transportado desde el medio externo al interior celular (o al menos a algún
"compartimento" donde se ve protegido del ataque de la nucleasa). Este paso del
proceso de transformación depende de:
- cationes divalentes (Mg++,
Ca++), o monovalentes (K+);
- una endonucleasa situada a
nivel de membrana (endonucleasa-I), que degrada la cadena que previamente (en la fase 1ª)
había permanecido intacta.
En S. pneumoniae:
- La endonucleasa-I de membrana
rompe la cadena que previamente había quedado intacta, y a partir del sitio de corte va
degradando esta cadena no unida al complejo receptor (liberando oligonucleótidos de 1 a
10 bases de longitud). Simultánea y concomitantemente con esta acción, la otra cadena
(la que antes se había unido al receptor) va pasando al citoplasma, comenzando por su
extremo 3', y progresando hacia su extremo 5', a expensas precisamente de la energía
derivada de la hidrólisis de la cadena opuesta.
- Conforme va entrando, esta
cadena va siendo recubierta por monómeros (de unos 20 kDa) de una proteína
específica, hasta formarse el complejo de eclipse (entre ese ADN de c.s. y las
proteínas). Dicho complejo cumple dos funciones:
- Si utilizáramos este ADN de
c.s. del complejo de eclipse para intentar una nueva transformación, no podría ser
reconocido por el complejo receptor que describimos anteriormente. Esta es la razón de la
existencia de lo que hemos denominado período de eclipse.
Destino del ADN del exogenote
Recombinación de la cadena sencilla del exogenote con la zona complementaria del
endogenote, previo desplazamiento y ulterior degradación de la cadena homóloga de éste.
Esta recombinación homóloga es muy eficiente (un 50% del ADN transportado se integra).
- Como resultado de esta
integración se forma un heterodúplex.
- Si el heterodúplex posee
malos emparejamientos de bases (debido a que la secuencia del exogenote no es idéntica a
la del endogenote), pueden ocurrir dos alternativas, dependiendo de si estos malos
emparejamientos logran o no ser reparados antes del siguiente ciclo de replicación del
genóforo:
- si son reparados antes de la replicación se puede perder el marcador portado por el
endogenote, que se ve sustituido por el del exogenote;
- si el heterodúplex no se repara en el siguiente ciclo replicativo cada cadena servirá
de molde para una nueva doble hélice, pasando cada una a una célula hija. De este modo,
a partir de este evento de recombinación surge una progenie mixta: existe un subclon
recombinate y otro que no lo es.
Es de destacar que, además, S. pneumoniae posee un sistema muy refinado
para facilitar esta recombinación en los fenómenos de transformación:
- existe un gen (hex) que
codifica una proteína que se une a varios lugares concretos del genomio hospedador, e
interviene en la corrección de las bases mal emparejadas. Si el exogenote se integra
lejos de uno de los sitios reconocidos por Hex, no se ve reparado por dicho
sistema, el heterodúplex "escapa" a la corrección, y por lo tanto toda la
progenie heredará el marcador nuevo procedente del exogenote.
2.2.2 EN Bacillus subtilis
Las principales diferencias respecto del modelo del neumococo, en esta fase inicial de
competencia, son las siguientes:
- La competencia se desarrolla
después de la fase exponencial, durante el inicio de la fase estacionaria.
- Los "cultivos
competentes" son heterogéneos: existe una minoría de células (< 25%)
auténticamente competentes, y se encuentran en un estado metabólico alterado:
no replican más su cromosoma;
se embarcan en pocas actividades biosintéticas;
aumenta el número de mesosomas, muchos de ellos concentrados en la región ecuatorial.
Desarrollo de la competencia
Los últimos hallazgos sobre este sistema parecen indicar que la competencia en B.
subtilis está sometida a tres tipos de controles:
- Primer control, según la fase de crecimiento. Esto parece depender en última
instancia de la acumulación en el medio de un factor de competencia excretado durante la
fase previa a la estacionaria. El factor interacciona durante la fase estacionaria con
receptores de superficie, que "reemiten" la señal al interior celular, para que
se induzcan una serie de genes relacionados con la transformación.
- Segundo control, de tipo nutricional. Para que se induzca la competencia, el
medio de crecimiento ha de poseer glucosa como fuente de C, junto con una mezcla de
aminoácidos. Las señales nutricionales que detecta la bacteria para provocar el estado
de competencia parecen depender (al menos en parte) del agotamiento de algunos
aminoácidos y de alguna señal derivada del metabolismo de la glucosa.
- Tercer control, según el tipo celular. Como acabamos de decir, existen células
competentes y no competentes. Es aún un misterio cómo se desarrolla este
"dimorfismo" para la competencia. Lo que sí se sabe es que durante todo el
crecimiento, algunas células (probablemente las no-competentes) excretan al medio ADN de
alto peso molecular, que será la fuente del ADN transformante.
De esos controles, el mejor conocido hasta ahora es el relacionado con la
densidad celular, basado en la detección de una feromona, y que depende de un sistema
regulador de dos componentes (repasar el tema 22):
Mientras B. subtilis va creciendo, va segregando un péptido, denominado
feromona ComX. Obviemente, en un sistema cerrado, dicha hormona se va acumulando en el
medio.
- Cuando se alcanza cierto nivel
de ComX (y esto sólo sucede a partir de ciertas densidades altas de cultivo), esta
feromona interacciona con una proteína de membrana denominada CompP. CompP es una
histidín-proteín-quinasa, del tipo de los sensores autofosforilables. Cuando se le une
CompX, la ComP se autofosforila, y entonces fosforila a su vez a una proteína
citoplásmica llamada ComA.
La ComA~P es un regulador de respuesta, que en ese estado fosforilado actúa como
activador de la transcripción de varios genes, incluyendo el gen srfA, que se
requiere para inducir otros genes del estado competente.
(Curiosamente, parecen existir vínculos entre desarrollo de la competencia y
esporulación y no sólo mera coincidencia de sus respectivos desencadenamientos en el
tiempo, ya que hay genes que intervienen en la regulación de ambos procesos).
Entrada del ADN y fase de eclipse
- El complejo de eclipse queda retenido
transitoriamente el el espacio periplásmico.
- Al parecer (no está
confirmado) dicho complejo entra luego a través de los mesosomas ecuatoriales, que de
esta forma facilitarían el acceso del exogenote al cromosoma hospedador (recuérdese que
el mesosoma es el punto de anclaje del genóforo bacteriano).
2.3 TRANSFORMACIÓN EN BACTERIAS GRAM
NEGATIVAS
Una diferencia característica de los sistemas en Gram negativas con respecto a los de
Gram positivas es que el estado de competencia no depende de señal activadora
segregada al medio.
En las especies del género Neisseria las células se mantienen competentes
durante todo el ciclo de crecimiento, cosa excepcional dentro de los sistemas naturales de
transformación. Además, la transformación sólo se da en las cepas fimbriadas de Neisseria
(poseedoras de pelos o fimbrias, o sea, fenotipo Fim+).
Comparemos la transformación en Haemophilus (por ejemplo, en la especie H.
influenzae) con la de los sistemas Gram positivos estudiados más arriba:
- La competencia se da en fase
estacionaria.
- La competencia afecta al 100%
del cultivo.
- La competencia se induce internamente,
no existiendo factores liberados que actúen desde fuera.
- El sistema de entrada del ADN discrimina
entre ADN de esta especie (o, en todo caso de especies cercanas) y ADN de otras
procedencias: solamente capta ADN de especies del mismo género, y con gran eficiencia. La
secuencia en cuestión es la siguiente (se muestra sólo una de las cadenas):
5'AAGTGCGGTCA-3'. Dicha secuencia aparece repetida y repartida en el genomio de H.
influenzae unas 600 veces, a una media de una copia cada 4 kb. Como se puede
comprobar, esta frecuencia es muy superior (3 órdenes de magnitud) a la que predice el
cálculo de probabilidades en el caso de que apareciera aleatoriamente (4000 kb). Así
pues, el genomio de estas bacterias está "preparado" (mediante la existencia
sobreabundante y no-aleatoria de esta secuencia) para participar en eventos de
reconocimiento específico por parte de receptores encaminados a la entrada de ADN propio
por medio de fenómenos de transformación.
- Esta selectividad de secuencia
se debe a la existencia de unos pocos (3-4) complejos receptores de superficie, dispuestos
en prolongaciones vesiculares de la membrana externa (transformosomas), que
reconocen esa secuencia específica de 11 pb a partir de trozos de ADN de cadena doble de
unas 30 a 50 kb.
- El ADN entra en forma de doble
cadena a través del transformosoma.
- No existe complejo de eclipse
entre ADN y proteínas.
- El ADN de c.d. del exogenote
se despliega en sus dos cadenas, una de las cuales es recombinada con la porción
equivalente del endogenote (por desplazamiento de la porción homóloga de ese
endogenote).
2.4 SIGNIFICADO BIOLÓGICO DE LA
TRANSFORMACIÓN NATURAL
Como acabamos de ver, los sistemas naturales de transformación representan mecanismos,
a veces bastante sofisticados, de transferencia génica en ciertas bacterias, y no deben
en absoluto considerarse como meras "curiosidades" o "accidentes" de
algunos procariotas. Géneros como Haemophilus, Streptococcus o Bacillus
presentan exquisitos refinamientos moleculares encaminados, en última instancia, a
facilitar expresamente la recombinación genética tras un proceso específico de
transformación, induciendo una serie de funciones totalmente exclusivas para tal
propósito. Estos mecanismos han debido de evolucionar debido probablemente a ciertas
presiones selectivas del ambiente, y han sido "aprovechados" para producir un plus
de diversidad genética, que debe de jugar un papel importante en la dinámica ecológica
de las especies que lo poseen. Así, por ejemplo, parece ser que el sistema de
transformación de Neisseria gonorrhoeae (el gonoco) permite que esta bacteria
cambie más fácilmente determinadas moléculas de superficie, de modo que estos cambios
antigénicos suponen una ventaja adaptativa para evadir el sistema inmune del hospedador
mamífero.
Una pregunta más difícil de responder es la del origen evolutivo de la capacidad de
transformación. Aquí caben diversas hipótesis.
- Hipótesis de la
reparación de ADN: sugiere que la capacidad de competencia apareció en B.
subtilis. (esporulante) como un sistema de obtener moldes de ADN para la reparación.
La argumentación sigue el siguiente curso: se sabe que la competencia en esta especie
está regulada por controles que son en parte comunes con los del desencadenamiento de la
esporulación (recordar que decíamos que en B. subtilis la competencia se induce
en fase estacionaria, lo cual también ocurre con la esporulación). Por otro lado,
también se recordará que al final de la fase exponencial ocurren grandes cambios
metabólicos en esta bacteria, siendo uno de ellos el que pasa de un metabolismo
fermentativo a uno oxidativo. En el metabolismo oxidativo se producen numerosos radicales
libres, que pueden provocar daños en el ADN. Por lo tanto -concluye esta hipótesis- , no
sería extraño que la competencia hubiera evolucionado como una forma de obtener ADN de
repuesto, que capatarían ciertos individuos de la población, para usarlos en la
reparación de sus genomios. Posteriormente el sistema se refinaría y seviría para
incrementar la variabilidad genética y la capacidad de adaptación. (De hecho, en B.
subtilis y en S. pneumonie se ha visto que el gen recA de la
recombinación homóloga se induce en respuesta al desarrollo de la competencia.
- Hipótesis de la nutrición:
Quizá pudo surgir como una manera de obtener nutrientes adicionales a partir de ADN
exógeno.
- Hipótesis de la
recombinación: pudo haber una presión selectiva que favoreciera el desarrollo de un
mecanismo de intercambio y recombinación de ADN, por los que las poblaciones de ciertas
bacterias podrían poner a prueba nuevas combinaciones de genes (algo parecido a lo que
pasó con el desarrollo de la sexualidad en los eucariotas). Ello aumentaría la
diversidad y podría acelerar la evolución. De hecho, algunas de las especies
transformables de modo natural "excretan" ADN durante el crecimiento. Ese ADN,
captado en el caso de Haemophilus o Neisseria de un modo muy específico, puede
favorecer la adaptación de otros miembros de la especie. De hecho, en esas especies,
parece que la transformación aumenta la diversidad antigénica, y por lo tanto son
mejores las probabildades de sobrevivir en el huésped al que parasitan.
3. TRANSFECCIÓN
Se define la transfección como la infección de una célula hospedadora mediante ADN
obtenido de un virus. El ADN del virus así introducido, al expresar su programa genético
en la célula, termina desencadenando la producción de nuevas partículas de virus
dentro, que al igual que en la infección "clásica" por virus completos,
conduce a la muerte y lisis de la célula, con la liberación de la progenie de nuevos
viriones. Las características de unión de ADN y entrada dependerán del sistema de
células competentes que se esté empleando, mientras que el resultado de la transfección
depende (al igual que en los ciclos líticos naturales de los virus) del programa del
virus en cuestión.
4. TRANSFORMACIÓN ARTIFICIAL
Muchas especies bacterianas carecen de sistemas naturales de transformación. En los
últimos años se ha logrado desarrollar sistemas artificiales para producir
"células competentes" en algunas de ellas (como Escherichia coli, Salmonella
typhimurium y algunas especies de Pseudomonas), lo cual ha hecho avanzar los
estudios genéticos, especialmente mediante manipulaciones in vitro: por ejemplo,
la transformación artificial de E. coli con ADN plasmídico es una de los métodos
básicos de la Ingeniería Genética.
La obtención de células competentes en E. coli consiste en ir concentrando un
cultivo recogido en fase logarítmica, mediante lavados sucesivos en una solución fría
(4ºC) de Cl2Ca, tras lo cual la mezcla de células y ADN se someten a unos 2
min. a 42ºC (choque por calor). Este tratamiento altera las envueltas (sobre todo la
membrana externa) y aumenta su permeabilidad al ADN. Los plásmidos entran a la célula
como moléculas de cadena doble intactas, mientras que los ADN lineales, que entran de la
misma forma, son degradados por nucleasas citoplásmicas (RecBCD). Los transformantes se
suelen seleccionar en base a la resistencia a algún o algunos antibióticos conferidos
por los plásmidos artificiales usados en Ingeniería Genética.
En otras bacterias (p. ej., en ciertas Gram-positivas) el método consiste en obtener
protoplastos en medio hipertónico, y posterior tratamiento de éstos mezclados con el ADN
con un agente como el polietilénglicol, que fomenta la fusión de protoplastos y el
englobamiento de ADN exógeno.
Más recientemente se ha introducido la técnica de la electroporación: las
células se someten a cortos pulsos de corriente eléctrica de alto voltaje, lo cual
altera las envueltas y permite la captación de ADN en una amplia variedad de bacterias,
tanto Gram-positivas como Gram-negativas.
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BIBLIOGRAFÍA
LIBROS DE TEXTO Y DE CONSULTA
DAVIS y otros: Microbiología (4ª edición) (Masson-Salvat).
JIMÉNEZ SÁNCHEZ, A., A. GUERRERO (coords.): Genética Molecular Bacteriana
(Ed. Rerverté, Barcelona 1982): Cap. 3, sobre Transformación y Cap. 4, sobre
Transfección.
JIMÉNEZ SANCHEZ, A., JIMÉNEZ MARTÍNEZ, J (1998): "Genética microbiana".
Ed. Síntesis.Madrid.
MALOY, S.R., J.E. CRONAN, D. FREIFELDER (1994): "Microbial genetics" (2ª
edición). Jones and Bartlett Publishers, Boston y Londres. (Consultar capítulo
13).
SNYDER, L., Y W. CHAMPNESS (1997): Molecular Genetics of Bacteria. Washington
DC: American Association for Microbiology. (Consúltese el cap. 6).
STANIER y otros: Microbiología-2ª edición (Ed. Reverté). Muy recomendable la
lectura de las páginas 276-282 del capítulo 11 sobre transferencia genética.
SUZUKI y otros: Genética (4ª edición) (Ed. Interamericana-McGraw Hill,
Madrid, 1992). Véase cap.10, págs. 243-244.
ARTÍCULOS DE REVISIÓN
DUBNAU, D (1991a): The regulation of genetic competence in Bacillus subtilis.
Molec. Microbiol. 5: 11-18.
DUBNAU, D (1991b): Genetic competence in Bacillus subtilis. Microbiol. Rev. 55:
395-424.
HANAHAN, D., F.R. BLOOM (1996): Mechanisms of DNA transformation. En: "Escherichia
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edición (F.C. Neidhart, ed.). American Society for Microbiology Press. Washington, D.C.,
págs. 2449-2459.
SCOCCA, J.J. (1990): The role of transformation in the variability of the Neisseria
gonorrhoeae cell surface. Molec. Microbiol. 4: 321-327.
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actualizado 1998-08-06
Ó
1998 ENRIQUE IAÑEZ PAREJA. Prohibida su reproducción, salvo con fines
educativos. Escríbame a eianez@goliat.ugr.es